У Вестерн Блот (ВБ) експериментима, скидање антитела се углавном користи у следећим сценаријима, у зависности од експерименталних потреба и својстава антитела:
1. Откривање више циљева на истој мембрани
Када је количина узорка ограничена или су потребни доследни услови за препознавање, скидање омогућава поновну употребу мембране. Примери укључују:
1) секвенцијално откривање различитих циљева:Прво откривају протеине са ниским обиље, а затим скините и откријте оне који су високо обиље људи како би се избегло непотпуно скидање.
2) Враћање више маркера:На пример, откривање протеина у истом сигналном путу (нпр. Фосфорилацираним и укупним протеинима). Прво инкубирајте фосфо-антитело, а затим се скините и сонда за тотални протеин да осигура упоредивост података.
2 Оптимизација инкубације антитела или верификације специфичности
1) искључује неспецифично везивање:Ако се појаве неочекивани бендови, скидање и репродукцију различитих антитела може вам помоћи да потврдите унакрсну реактивност.
2) Подесите налогу за антитело:Прво откривање слабих или лако одузетих антитела, праћено јачим.
3. Уштеда узорака и времена
1) Ограничена доступност узорка:За ретке или драгоцене узорке (нпр. Клиничке или примарне ћелије), поново је у поновном покретању мембране смањује употребу узорка.
2) Бржи експериментални преокрет:Скидање је брже од поновног преношења гела и преноса, идеално током оптимизације.
4. Посебне експерименталне потребе
1) Исправка контроле утовара:Откријте циљане и референтне протеине узастопно на истој мембрани како би се избегла варијација серије.
2) Подешавање блокирања:Ако БСА нарушава да се скида ефикасност, пребаците се на брз блокатор без икаквог сервица или обрано млеко да би побољшао резултате.
Напомене:
Лимит за скидање:Мембрана се обично може скинути 3-4 пута; Прекомерно скидање може резултирати губитком протеина.
Провера ефикасности:Увек потврдите уклањање антитела ЕЦЛ откривањем да бисте избегли лажне позитивне позиције.
Укратко, скидање антитела идеалан је за вишеструко детекцију, валидацију резултата и очување узорка. Изаберите Степпинг Стрип засновани на вашем експерименту и антителовима.
ПрепоручујемоСервицебио антитело скидање пуфераЗа сигурно и ефикасно уклањање основних и секундарних антитела из ПВДФ-а или НЦ мембрана:
G2078(Регулар): За слабе сигнале или антитела са ниским афинитетом.
G2079(Побољшано): за јаке сигнале или антитела високог афинитета.
