Т7 комплет за транскрипцију високог приноса

 

Назив производа	Кат.бр.	Спец.
Т7 комплет за транскрипцију високог приноса	G3021-50T	50 T

 

 

Комплет за транскрипцију Т7 високог приноса је комплетан систем за ефикасну синтезу РНК за блот ин ситу хибридизационе сонде, тестове заштите рибонуклеазе, пост-транскрипционе модификације укључујући спајање РНК и полиаденилацију, и за ин витро транслацију. Т7 РНК полимераза је веома специфична за сопствени промотер и транскрибује велике количине РНК из ДНК секвенци (на пример, плазмида, фрагмената ланчане реакције полимеразе (ПЦР) или синтетичке ДНК) низводно од свог промотера,

У реакционом систему, 1 уг улазног шаблона може произвести више од 100 уг РНК, што је погодно за припрему РНК различитих дужина.

 

 

 

Брод са мокрим ледом; Чувати на -20 степену, важи 12 месеци.

 

 

Цомпонент Нумбер	Компонента	G3021-50T
G3021-1	Мешавина ензима транскрипције Т7 РНК	200 μL
G3021-2	5×Т7 транскрипциони реакциони пуфер	250 μL
G3021-3	25 мМ НТП мешавина	100 μL
G3021-4	Дназа И	50 μL
G3021-5	Вода без нуклеазе	1 мЛ
G3021-6	Контролни шаблон (0.5 уг/μЛ)	10 μL
Мануал		Један примерак

 

 

1. Припрема за шаблон:

а. Плазмид који садржи Т7 промотер: да би се добила РНК специфичне дужине, плазмид треба да буде потпуно линеаризован и пречишћен као шаблон. Линеализација плазмида са рестрикцијским ензимом треба да произведе 5' превис или тупи крај (избегавајте 3' истурени крај). Препоручена количина шаблона по реакцији је ~1 уг;

б. ПЦР производ или синтетичка ДНК: 5 'крај прајмера некодирајуће ланца фузионисан са секвенцом из Т7 промотора (5'-ТААТАЦГАЦТЦАЦТАТАГГГ-3') врши ПЦР амплификацију. ПЦР производи могу бити директно коришћени као шаблони за транскрипцију без пречишћавања, али ће се принос РНК повећати након пречишћавања. Препоручена количина шаблона по реакцији је ~0.5 уг.

2. Ин витро транслациона реакција:

а. Додајте следећу компоненту у стерилну епрувету без нуклеаза на леду према назначеном редоследу

б. Лагано промешајте и кратко центрифугирајте.

ц. Инкубирајте на 37 степени 2 х. (Подесите време реакције у зависности од циљне дужине и жељеног приноса РНК. На пример, РНК мања од 300 нт, препоручује се инкубација 4 х или дуже).

Компонента	Износ	Коначна конц.
Темплате	0.5-1 уг	25-50 µг/мЛ
5×Т7 транскрипциони реакциони пуфер	4 μL	1×
25 мМ НТП мешавина	2 μL	2,5 мМ
Мешавина ензима транскрипције Т7 РНК	4 μL
Вода без нуклеазе	До 20 μЛ	--

3. Третман ДНазом И

Након реакције, додати 1 μЛ ДНазе И, кратко промешати и инкубирати на 37 степени 15 минута.

4. Квантификација производа транскрипције

а. Анализа гел електрофорезе

Препоручује се 1% денатурирајући формалдехид агарозни гел.

б. Метода УВ апсорпције

Концентрација РНК производа одређена опремом за УВ апсорпцију након пречишћавања (слободни нуклеотиди ће утицати на тачност квантификације).

 

 

1. Носите одговарајуће рукавице и маске и користите потрошни материјал за једнократну употребу без РНасе да бисте спречили контаминацију РНасе.

2. Да бисте припремили обележену РНК, замените НТП мешавину у комплету одговарајућим реагенсом.

3. Дужина транскрипције контролног шаблона у комплету била је 500 нт.

4. Ради ваше безбедности и здравља, носите заштитне наочаре, рукавице или заштитну одећу.

 

Само за истраживачку употребу!

 

 

Popularne oznake: Т7 комплет за транскрипцију високог приноса, Кина Т7 комплет за транскрипцију високог приноса произвођачи, добављачи, фабрика